实验标准：中华人民共和国国家标准《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定（GB/T 20752-2006）》
实验方法
2.1.样品信息
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2.2.样品称取和脱脂
称取猪肉样品2g（精确到0.01g），置于50m棕色离心管中，加入15ml甲醇-水混合溶液（v:v=2：1），均质1min，再用5ml甲醇-水混合溶液洗涤刀头，二者合并8000r/min离心5min，吸取上清液倒掉。
注：为更好的消除基质效应对检测结果造成的影响，可加入同位素内标，采用内标法定量检测。
2.3.水解和衍生（注意避光）
向棕色离心管中加入20ml 0.2mol/l的盐酸溶液，涡旋1min使之混合均匀，之后加入0.3ml浓度为0.05mol/L的2-硝基苯甲醛，混匀，于37℃温水中避光衍生16小时。
2.4.净化处理
将衍生后的样品冷却至室温，加入5ml 0.1mol/l的磷酸氢二钾，并用1 mol/l的氢氧化钠溶液调PH约为7.4，混合均匀。之后用8000r/min离心10min,以小于2ml/min的流速过Cleanert® PEP-2小柱（规格为60mg/3ml，用5ml甲醇、5ml水活化），并用10ml的水洗涤固相萃取小柱，然后负压抽干柱子15min。用5ml乙酸乙酯洗脱于20ml棕色瓶中（此过程可在Qdaura卓睿TM全自动固相萃取仪上完成，仪器方法见附录B）。洗脱液于40℃下氮气吹干。
用样品定容溶液（10ml乙腈，0.3ml的乙酸用水稀释至100ml）定容至1ml，充分溶解，并用0.22µm滤膜过滤。
2.5.检测方法
色谱柱：Venusil® MP C18（2.1×150mm，5µm，100Å）
质谱仪：API 4000+
流动相：A:0.1%甲酸的水溶液 B:0.1%甲酸的乙腈溶液
表1 梯度洗脱条件
|
时间（min） |
A（%） |
B（%） |
|
0 |
80 |
20 |
|
1 |
80 |
20 |
|
3 |
50 |
50 |
|
7 |
25 |
75 |
|
7.1 |
5 |
95 |
|
10 |
5 |
95 |
|
10.1 |
80 |
20 |
|
16 |
80 |
20 |
流速：0.2mL/min
进样体积：5μL
离子源：电喷雾（ESI），正离子模式
扫描方式：多反应监测（MRM）
表2 质谱仪离子源参数
|
Source/Gas |
|
Collision Gas(CAD) |
6 |
|
Curtain Gas(CUR) |
15 |
|
Ion Source Gas 1(GS 1) |
50 |
|
Ion Source Gas 2(GS 2) |
50 |
|
Ion Spray Voltage(IS) |
5500 |
|
Temperature(TEM) |
600 |
|
Interface Heater(ihe) |
On |
表3 4种硝基呋喃待测物母离子和子离子参数表
|
物质名称 |
保留时间（min） |
监测离子对 |
DP |
EP |
CE |
CXP |
|
SEM |
8.10 |
209.1/166.1 |
51 |
10 |
17 |
10 |
|
209.1/192.1 |
51 |
10 |
17 |
10 |
|
AHD |
8.30 |
249.2/134.1 |
61 |
10 |
20 |
10 |
|
249.2/104.1 |
66 |
10 |
31 |
10 |
|
AOZ |
8.89 |
236.2/134.1 |
61 |
10 |
20 |
10 |
|
236.2/104.1 |
56 |
10 |
31 |
10 |
|
AMOZ |
3.12 |
335.3/291.2 |
46 |
10 |
19 |
10 |
|
335.5/128.1 |
46 |
10 |
19 |
10 |
0.5ppb猪肉基质加标回收实验结果：
表4 猪肉中0.5ppb加标回收实验结果
|
名称 |
1（%） |
2（%） |
3（%） |
平均回收率（%） |
RSD（%） |
|
|
109.43 |
97.84 |
109.75 |
105.67 |
6.42 |
|
SEM |
91.81 |
88.91 |
88.22 |
89.65 |
2.12 |
|
AHD |
80.68 |
82.11 |
77.25 |
80.01 |
3.12 |
|
AOZ |
83.94 |
80.70 |
80.85 |
81.83 |
0.02 |
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图1 4种硝基呋喃代谢物总离子图
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图2 SEM（209/166）质谱图
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图5 AMOZ（335/291）质谱图
附录B
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