|
摘要：测定六味地黄产品中马钱苷的含量。方法色谱柱：shim-packvpODS-C18(4.6mm×150mm,5μm),流动相：四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸(1∶8∶4∶87),检测波长：236nm,柱温：40℃,流速：1.0mL/min。
六味地黄产品由熟地黄、山茱萸、山药、泽泻、牡丹皮、茯苓6味中药组成,为补阴方药之祖,能滋阴补肾,对肾阴不足所致诸虚证均有良好的疗效,产品有丸剂(大蜜丸、小蜜丸、水蜜丸、浓缩丸)、颗粒剂、胶囊剂等剂型。《中国药典》、《部颁标准》中六味地黄产品不同剂型的质量标准不尽一致,即定量指标及测定方法不一致。在2005年版《中国药典》中丸剂采用高效液相色谱法测定马钱苷的含量,颗粒剂采用薄层色谱扫描法测定熊果酸的含量[1]；《中华人民共和国药品标准》中浓缩丸采用薄层色谱扫描法测定熊果酸的含量[2],胶囊剂却未规定含量测定。笔者认为,首先应统一测定方法,均用高效液相色谱法进行测定,其次是统一定量标准,均以山茱萸所含马钱苷为定量指标,使不同剂型含量一致,以科学评价和控制六味地黄系列产品的质量。
1仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪(美国)；AE-240电子天平(瑞士)；KQ-100超声波清洗器(昆山市超声设备有限公司)；HH-601恒温水浴锅(金坛市恒丰仪器厂)。
马钱苷对照品(111640-200401,购于中国药品生物制品检定所)；六味地黄丸(由甘肃众友甘南藏药有限公司提供)、六味地黄浓缩丸(由兰州太宝药业有限公司提供),六味地黄胶囊、六味地黄颗粒(实验室自制)。甲醇、乙腈均为色谱纯,中性氧化铝、四氢呋喃、磷酸均为分析纯(天津化学试剂厂)；水为重蒸水。
2方法与结果
2.1色谱分析条件
色谱柱：Shim-Packvp-ODS-C18(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸(1∶8∶4∶87)；检测波长：236nm；柱温：40℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。
2.2试验用溶液的制备
精密称取马钱苷对照品2.21mg,置于10mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密吸取1mL置于10mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
2.2.2供试品溶液的制备
蜜丸切碎,取约1g,精密称定,浓缩丸、颗粒剂、胶囊研细,各取约0.5g,精密称定,分别置具塞锥形瓶中,超声处理(功率250W,频率33kHz)15min,水浴加热回流1h,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液10mL,置中性氧化铝柱(100～200目,4g,内径1cm,干法装柱)中,用40%甲醇50mL洗脱,收集流出液及洗脱液,水浴蒸干,残渣加50%甲醇适量使溶解,并转移至10mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
2.2.3阴性对照溶液的制备
取按处方量及制备工艺制备的不含山茱萸的阴性空白对照样品,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.3空白试验
取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液,依上述色谱条件测定,从图1可见,其它成分对马钱苷的测定无干扰。
2.4线性关系考察
精密吸取浓度为22.1μg/mL马钱苷对照品溶液2、4、6、8、10μL,注入液相色谱仪,每一浓度注入3次,测得峰面积。以进样量(mg)为横坐标,峰面积平均值为纵坐标,得回归方程：Y=7.02×106X-13807.25,r=0.9997。表明马钱苷在0.044～0.221μg范围内线性关系良好。
2.5精密度试验
精密吸取同一供试品溶液(20051211)溶液,重复进样5次,马钱苷峰面积的RSD=1.58%,表明本法精密度良好。
2.6稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(20051211),分别在0、2、4、6、8、10h各测定1次,马钱苷峰面积的RSD=1.61%,表明供试品溶液在10h内基本稳定。
2.7重复性试验
取同一批供试品(20051211)溶液,平行精密称取5份,依法测定,马钱苷含量的平均值为1.874mg/g,表明本法重复性良好。
2.8回收率试验
精密称取已知含量的同一供试品(20051211)6份,分别精密加入一定量的马钱苷对照品,按供试品溶液的制备方法处理并测定。结果马钱苷的回收率为96.98%～100.15%。见表1。表1加样回收试验结果(略)
2.9含量测定
按拟定的供试品溶液制备方法和色谱测定条件,对10批不同剂型六味地黄样品进行含量测定,结果见表2。表2马钱苷含量测定结果(略)
3讨论
六味地黄产品成分复杂,完全提取较为困难,经比较试验,采用超声波→热回流→柱吸附相结合的提取分离技术提取马钱苷,不仅排除了方中其他成分的干扰,而且方法的精密度、回收率等均达到测定要求。
在选择流动相时,曾对乙腈-水(15∶85)、甲醇-水(30∶70)等进行了比较,结果以四氢呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸(1∶8∶4∶87)作为流动相,马钱苷与其它组分达到较好分离。
|
