在样品提取步骤获得的水相或有机相样品提取液中，待测四环素类抗生素的浓度可能非常低，而且还可能含有共提取物。如果样品的最终溶液中含有共提取物，会增加检测器的背景噪声，难以检测痕量浓度水平的待测物质。为减少干扰和浓缩待测化合物，初始样品提取液需要采用进步的净化步骤，如液-液分配、同相萃取、基质固相分散、超滤、免疫亲和色谱或在线微量富集技术。在许多情况下，为提高净化效果，会结合采用多个净化步骤。

    程霉梅等建立了海产品中四环素类抗生素(四环素、土霉素、金霉素、强力霉素)残留置的测定方法。样品经过2％的高氯酸提取C18固相萃取柱净化，以乙腈-水-氟乙酸体系为流动相，采用电喷雾离子源以正离子检测方法进行质谱分析。结果品示，样品中4种化合物的定量限为金霉素0．02 mg/kg，其他3种化合物均为0.006mg/kg；平均叫收率为50．2％～91．2％，RSD为4.0％～9.2％。

    

    基质固相分散技术能够依靠填料颗粒的机械剪切力和键合相C18的去垢作用，集样品匀浆、提取、净化过程于一体，有样品处理速度陕、节约溶剂等优电，被广泛应用于兽药残留的分析。Long等首次将基质固相分散技术应用于牛奶中四环素残留的检测，将C18、EDTA二钠、草酸和添加3种四环素类药物的牛奶样品研磨混合，制成半固态装柱，淋洗，最后以乙酸乙酯-乙腈(1：3)洗脱药物，蒸下复溶，HPLC-PDA测定；以100～3200 ng/mL浓度添加样品，回收率为63.5％～93.3％。在草酸中添加等比例的EDTA可使牛奶中四环素类抗生素的提取变得更为容易。宋欢等利用该方法测定了牛奶中的四环素残留。将鱼肉样品和C18填料研磨混合、装柱、淋洗、洗脱，使待测样品得到富集，同时使杂质得到有效的净化，最后利用高技液相色谱进行检测分析。色谱分离采用C18柱，以3％醋酸缓冲溶液、乙腈为流动相，梯度洗脱，流量为1.0mL/min，使用紫外检测器于355 nm波长下检测。四环素、金霉素检出限为0.010 mg/k，土霉素、强力霉素检出限为0.020 mg/kg。平均加标回收率为73.2％～92．3％，相对标准偏差为3.2％～9.4％。

    固相微萃取技术、微透析技术也被应用于四环素类药物的检测，并可获得很好的效果。